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上海亞榮對酸水解—氨基酸分析前處理方法的應用實踐(二)

上海亞榮生化儀器廠

蒸干溶劑( 趕酸) 過程蒸干溶劑( 鹽酸) 是為了去除高濃度的鹽酸,防止在上機時損壞儀器。關于蒸發去酸時的溫度,標中有40 ~ 50 ℃和60 ℃的不同參考。有人認為, 70 ~ 80 ℃也是可行的。筆者在試驗中采取了65 ℃,發現對試驗結果無不良影響,適時提高溫度可以加快蒸干速度,故在不影響氨基酸回收率的情況下,可選擇相對較高的溫度。

  蒸干過程中可用氮吹儀或上海亞榮旋轉蒸發儀,根據經驗當每個樣品只取少量( 如1 ml) ,很多樣品時,可以選用氮吹儀; 當每個樣品取樣量比較多的時候,旋轉蒸發儀較為合適。使用氮吹儀時,大概每1 ml 的樣品量需要40 min 完全蒸干,如果取樣量大,所需時間更長,且氮氣消耗量很大,故不合適。當每次取樣量比較多時( 如5 ml) ,選用上海亞榮RE-52AA型旋轉蒸發儀,通常第個樣品蒸干比較慢,主要是由于溫度還沒有升上去,隨后的樣品會越來越快,大概6 min 就可以完全蒸干( 儀器的不同性能狀況其時間可能略有不同) ,連續做定量的樣品時,會發現蒸干速度變慢,查看循環水真空泵內的循環水溫度可能比較高,此時通過加些冰塊降低溫度,蒸干速度又會提上來。

   緩沖液稀釋過程樣品經過蒸干后需用緩沖液稀釋后才能上機,標中采用由定量的檸檬酸鈉和濃鹽酸配制而成pH 2. 2 緩沖液,這主要是與氨基酸分析儀所用到的檸檬酸鈉緩沖液的體系有關。在具體應用中,氨基酸分析儀( 以日立公司為例) 有兩套分析體系,套用檸檬酸鈉緩沖液,另套用檸檬酸鋰緩沖液,這樣在用不同體系時即需配不同的緩沖液來稀釋。在日常分析工作中,通常使用0. 02mol /L 鹽酸來稀釋,而實際中不少實驗室都是采用這種方法。使用0. 02 mol /L 鹽酸代替檸檬酸鈉緩沖液使操作更簡單方便。

   前處理方法的選擇

  在實際應用中氨基酸分析中前處理有很多種,需要根據不同試驗目的選用不同前處理方法,如何選擇合適的前處理方法,以下幾點可提供參考。

  ( 1) 氨基酸主要有兩種存在形式,種是以結合態存在于肽和蛋白質中; 另種是以游離態存在于生理體液( 血漿和尿液) 、食品( 酒和飲料) 和藥品中。測定第種類型的氨基酸,常用的是酸水解法,同時還有堿水解法和氧化水解法; 測定第二種類型的氨基酸,常用的是酸提取法( 0. 10 mol /L 鹽酸或定濃度的磺基水楊酸) 。

  ( 2) 酸水解法能測定組成蛋白質的絕大多數氨基酸,但色氨酸會被完全破壞,含硫氨基酸會被部分破壞( 胱氨酸和蛋氨酸) ,天冬酰胺和谷氨酰胺會因不穩定轉化為相應的酸被測定; 堿水解法般用來測定色氨酸; 氧化水解法可用來測定含硫氨基酸。

  ( 3) 般當測定與營養品質或蛋白質代謝相關的指標時,宜選用測定結合態的蛋白質的前處理方法; 般當測定與生長抗逆或酰胺類等游離氨基酸含量相關的指標時,宜選用測定游離氨基酸的前處理方法。

  4 結語

  酸水解是氨基酸分析中常用的種前處理方法。現今測定與蛋白質營養相關指標多是通過酸水解的前處理方法,適時改進和簡化操作步驟,對于方便實際應用具有定的參考價值。該研究結合實踐應用過程,提出了在具體操作過程中需注意的問題和可方便簡化的步驟,相關工作人員在

實踐中可嘗試運用。

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